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技術支持

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1、目的:

對微生物標準菌株的驗收、複活、確認、轉代、儲存、使用、廢棄等進行規定,確保標準菌株符合要求,保證檢測結果。

2、職責:

2.1、檢測中心主任負責標準菌株資源的配備。

2.2、微生物檢測室工作人員負責標準菌株的有效儲存和正確的使用。

3、要求:

3.1、供應商的選擇:選擇有資質的標準菌株的合格供應商,每批標準菌株必須有附件的供應商的合格證或檢測報告,來證明所采購的標準菌株是合格的。

3.2、標準菌株和驗收

菌株一到實驗室,一定要記錄好菌株號和標準菌株來源,確保溯源性清楚。同時,還應盡可能多的菌株信息,如:標準菌株名稱和數量、生產日期、接收日期和有無破損等。

3.3、凍幹標準菌株的複活:

3.3.1、開啟產品包裝:先用70%酒精棉擦拭外包裝,從凹口處撕開產品外包裝,撕掉標簽上的拉片,將其貼於菌株保藏管上。

3.3.2、複活:選擇合適的培養基和培養條件(根據生產商說明)進行複活。凍幹菌株的傳代次數不得超過5代,從標準菌株保藏中心購買的凍幹標準菌株為第F0代。捏管帽處安瓿瓶(僅一次)使其釋放水合液體。垂直握住安瓿瓶並輕拍之,使液體流入含小球的管底。通過擠捏壓碎小球使其與液體混合,立馬上拭子浸於水合液體。擠壓並旋轉拭子,接種於初級培養平板,接種圈的直徑約為25mm,用一無菌接種環在先前接種區域劃線10~20次,促使分離出單菌落。同時吸出部分菌液接種胰蛋白腖大豆肉湯管,副溶血性弧菌接種3%氯化鈉胰蛋白腖大豆肉湯管。將接種好的平板和管馬上 進行培養。細菌培養溫度通常為25℃或37℃。多數凍幹菌株會在幾天後長出,但是少數菌會表現出延滯期延長的現象,需要將正常培養時間加倍。複活後的菌株為F1代。

3.3.3、將TSB生長的濃菌液吸0.5mL於菌株保藏管充分混勻後將液體吸出,將保藏管-18℃保存1~3年為標準儲備菌株F2代。將平板上生長的良好菌株接種於營養瓊脂斜麵(副溶血性弧菌用3%氯化鈉營養瓊脂)36℃培養24h當作工作菌株,為W3代,記錄為F2代。

3.3.4、工作菌株確認方法及依據:

大腸杆菌的確認依照“SN 0169-1992出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸杆菌檢驗方法”執行。

金黃色葡萄球菌的確認依照“SN/T 0172-2010進出口食品中金黃色葡萄球菌檢驗方法”執行。

沙門氏菌的確認依照“SN 0170-1992出口食品沙門氏菌屬(包括亞利桑那菌)檢驗方法”執行。

副溶血性弧菌的確認依照“SN/T 0173-2010進出口食品中副溶血性弧菌檢驗方法”執行。

3.4、工作菌株的儲存:

3.4.1、大腸杆菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、儲存在2℃~8℃的冰箱內。

3.4.2、副溶血性弧菌在常溫條件下保存。

3.4.3、儲存期限:大腸杆菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌為3個月。

3.5、標準菌株的轉接:

3.5.1、標準菌株的複蘇:

① 菌種操作應在無菌條件下進行,防止雜菌汙染。

② 每次使用和複蘇時隻需將小珠在平板上滾動或置肉湯中培養。

3.5.2、標準儲備菌株每轉接一次須進行確認。

3.5.3、工作菌株轉接的方法:

① 配製營養瓊脂培養基(副溶血性弧菌加3%氯化鈉)並分裝在試管內,121℃高壓滅菌15分鍾後擺斜麵,冷卻後備用。

② 在無菌條件下,用接種環挑取菌苔至新奇斜麵上作“之”字形劃線接種,放置在36℃的培養箱內培養24小時。

3.6、工作菌株的使用:

3.6.1、內部質量操縱 :一個月一次陽性對比 、培養基每批驗收;

3.6.2、外部質量操縱 :能力驗證、實驗室比對。

3.7、工作菌株的期間核查:

3.7.1、期間核查的頻率:每半年對使用標準菌株進行一次期間核查。

3.7.2、工作菌株期間核查的方法及依據:同工作菌株的確認。

3.7.3、建立標準菌株期間核查記錄。

3.8、標準菌株的廢棄:

3.8.1、標準菌株如已老化、退化、或變異、汙染等,經確認試驗不符合的或該菌種已無使用需要的應及時銷毀。

3.8.2、廢棄的標準菌株由部門負責人批準,使用人員放入高壓鍋內121℃30min高壓滅菌後作為廢棄物處理。


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